聚乙二醇/醋酸锂溶液

制品内容

产品简介

PEG（聚乙二醇）作为高分子聚合物，在酵母感受态转化体系中，当分子量约为3000时能最显著提升转化效率。其作用机制包括：1）在高浓度LiAc条件下保护细胞膜完整性，降低LiAc对膜结构的损伤；2）促进质粒与酵母细胞壁的紧密结合。LiAc（乙酸锂）则通过诱导酵母细胞进入短暂感受态，使其获得外源DNA摄取能力。

保存

4℃，保存两年。

使用方法

1）将Carrier DNA置于95℃金属浴5分钟或95℃水浴3分钟，随后立即转移至冰上冷却。
2）取100μl冰上融化的酵母感受态细胞，依次加入预冷目的质粒（2-5μg）、预处理Carrier DNA（10μl）和PEG/LiAc溶液（500μl），轻柔吸打混匀后30℃水浴30分钟（15分钟时翻转混匀6-8次）。
3）将反应管置于42℃水浴15分钟（7.5分钟时翻转混匀6-8次）。
4）5000rpm离心40秒弃上清，加入400μl ddH?O重悬，再次离心30秒弃上清。
5）用50μl ddH?O或0.9% NaCl重悬细胞沉淀，涂布于选择培养基平板。

产品组分与配方

注意事项

1）PEG溶液长期静置会产生沉淀，使用前必须充分振荡混匀，确保各组分均匀分布。
2）未开封的PEG/LiAc溶液可4℃长期保存；开封后建议-20℃保存，若发现污染应立即弃用。

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